foto principal de GENERALIDADES SOBRE LAS PRUEBAS SEROLÓGICAS PARA LA DETECCIÓN DE ANTICUERPOS SARS-CoV-2

En el documento "GENERALIDADES DE PREUBAS SEROLÓGICAS PARA DETECCIÓN DE ANTICUERPOS CONTRA SARS-CoV.2" El Ministerio de Salud y el Instituto Nacional de Salud hablan de las generalidades del virus, las diferentes metodologías en pruebas serológicas y su uso.

"4.1 Ensayos de flujo lateral inmunocromatográfico (pruebas rápidas):

Es un ensayo cualitativo. Se desarrolla en un dispositivo portátil al cual se le coloca un volumen de muestra aproximado entre 10±5 μL, esta es absorbida por una almohadilla y posteriormente con ayuda de buffer tampón de corrida es transportada mediante flujo lateral cromatográfico a través de una tira de nitrocelulosa. En el extremo principal de la tira se encuentra dispuesto un conjugado formado por un reactivo colorimétrico (usualmente oro coloidal) que se conjuga, dependiendo el método de fábrica, ya sea con antígenos virales o con anticuerpos anti IgG o IgM humano, si la muestra analizada contiene anticuerpos contra el virus estos reconocerán el antígeno viral uniéndose a este, o si se parte de anticuerpos anti IgG o IgM humano los anticuerpos de la muestra serán reconocidos por estos, este conjugado seguirá transportándose por la tira hasta llegar a una zona donde los conjugados son capturados por antígenos virales o anticuerpos anti IgG o IgM humano dependiendo la nominación del kit o el tipo de conjugado, al retener estos se vuelven visibles al ojo humano formando una banda de color. El resto de partículas sigue transportándose por la tira hasta la zona de control en el borde inferior de la membrana, alcanzada esta, será visible una banda de color la cual indica que la muestra se desplazó hasta el final del dispositivo indicando ser una prueba válida, si esta banda no es visible la prueba queda invalidada. Se ha evidenciado que estas pruebas pueden dar falsos negativos y falsos positivos, esto debido a diferentes factores, los falsos negativos están mayormente asociados al curso natural de la enfermedad dependiendo la respuesta inmune individual, si la prueba se realiza antes de los primeros 11 días luego del inicio de los síntomas es muy probable arroje falsos negativos por que las concentraciones de anticuerpos en sangre no alcanzan a ser detectados, de igual forma se ha observado que hay diferencia significativa en la producción de anticuerpos en personas sintomáticas dependiendo su gravedad y personas asintomáticas como ya se nombró anteriormente. Los falsos positivos se presentan por reacciones cruzadas de anticuerpos que reconocen antígenos virales similares debido a las regiones conservadas entre coronavirus.

4.2 ELISA

Es un ensayo cuantitativo, al permitir dar un resultado relativo de la concentración de anticuerpos mediante dilución de la muestra (titulación de anticuerpos).

Existen tres diferentes tipos de ELISA directo, indirecto y tipo sándwich, para la detección de anticuerpos los utilizados son los dos últimos. Esta técnica se realiza en placas de microtitulación.

Para el ELISA indirecto los pozos de la placa se recubren con antígeno del virus, posteriormente se adiciona la muestra del paciente, si los anticuerpos están presentes en la muestra se unirán a los antígenos fijados previamente, luego de esto se añade un conjugado conformado por una enzima (Ej. peroxidasa) unida de forma covalente a un anticuerpo que reconoce la inmunoglobulina que de estar presente se unirá, y finalmente se adiciona al pozo un sustrato cromógeno el cual reacciona con la enzima del conjugado y produce un cambio de color, el cual es medible con un equipo especifico de lectura (espectrofotómetro).

El ELISA tipo sándwich es una variación del ELISA directo, los antígenos del virus no están directamente fijados a la superficie de la placa de microtitulación sino que se encuentran unidos a anticuerpos específicos del virus fijados con anterioridad a la placa. Estas pruebas permiten dar un resultado relativo de la concentración de anticuerpos mediante dilución de la muestra dando un resultado de titulación. Para cada montaje se colocan controles positivos y negativos para validar que el montaje fue adecuado. La mayoría de estudios que evalúan la cinética de producción de anticuerpos frente a COVID-19 han utilizado esta metodología, usando antígenos recombinantes de la proteína S del virus dominio de unión al receptor (RBD) y proteína N (4), observando una mayor sensibilidad mediante esta técnica.

4.3 CLIA

Este ensayo tiene como base el mismo fundamento de la prueba ELISA anteriormente explicada, estas dos se diferencian principalmente por el método usado en la detección de la reacción final, la enzima usada en el ELISA reacciona con un sustrato cromógeno y produce un cambio de color visible, a diferencia la enzima usada en el CLIA produce una reacción quimioluminiscente (sustrato luminiscente) emitiendo fotones produciendo luz en vez de un cambio de color. Esta tiene más ventajas siendo mucho más sensible pues permite la detección de concentraciones de anticuerpo más bajas, los sustratos utilizados tienen una vida útil mayor y los tiempos de incubación son más reducidos que en los métodos de ELISA. Su lectura solo puede realizarse con un lector de quimioluminiscencia."

Información extraída de "GENERALIDADES DE PREUBAS SEROLÓGICAS PARA DETECCIÓN DE ANTICUERPOS CONTRA SARS-CoV-2"

Para más información puede leer el artículo completo aquí

Solicite su toma de muestra por CLIA aqui

 


Participe y comente esta publicación: